· poliatrilidoaGel akrilamidaren monomeroaren, polimerizazioaren hasieraren materiala, katalizatzailea eta gatza eta bufferraren nahasketa elkarrekin behar ditu.
· akrilamidaeta bis (n, n '- metileno bikoitza akrilamida) Gel Matrix forma monomer da.
· Ammonio persulfato polimerizazio prozesu itsasgarria hasten da. Kola formulatzeak uretan prestatutako% 10eko amonioaren persulfato konponbidea behar du. Informazio gehiena erabilera aktiboaren beharra adierazi zuen. Hala ere,% 10eko irtenbidea 4 ℃-tan koka daiteke zenbait astetan jarduera galera garrantzitsurik gabe. Gehitu 10 ml eta baztertu kola agregatzen ez denean.
Aholkua: portzentajeaakrilamidaKola eta proteina kola sekuentziazioan ez da gauza bera. Acrylamide premiala erabiltzen baduzu: BIS soluzioa, ziurtatu botila egokia lortuko duzula.
· Temen: N, N, N ', N' - tetrametil etiledinedia) katalizatzailea da, botila marroi batean, hozkailuan jarrita. Gehitu kola bota baino lehen.
· Polyacrlamideko elektroforesia elektroforesian erabilitako beirak garbitu behar dira aldi bakoitzaren aurretik eta ondoren. Elektroforesiaren ondoren, garbitu eskuila leun batekin eta oihalez xaboi beroarekin, garbitu ur destilatuarekin eta egon lehortu.
· Hezetasuna eta hautsak polimero hutsak eragin ditzake. Elektroforesiaren aurretik, garbitu beirazko plaka beirazko garbitzailearekin eta garbitu eskuila leun batekin. Garbitu ur destilatuarekin eta lehortu ondo paperezko garbi batekin. % 70 etanolarekin garbitzeak paperarekin garbitu aurretik garbitzen eta lehortzen azkartzen laguntzen du. Gehitu akrilamidoaren laginak segidan: bis, ura, bufferraren soluzioa, amonioaren persulfatoa, tematua. Ondo astindu eta berehala bota.
Ez da policramididerik policramiderik polimerizatu aurretik. (Akrilamida burbuilak kentzeko hutsean jartzen zen oxigenoak polimerizazioa inhibitzen duelako.)
Kola puntuko lagin horizontalak.
· Jarri paper beltz zati bat beheko kaxan, hondo beltza, lagin zulo bat argiago ikusteko.
· Kola depositua betetako bufferra, koloidearen gainetik.
· Ertzak argia badu, piztu argiak, utzi argiak koloidoa. Marraztu lagina pipetan.
· Hoditeria automatikoa erabiltzea.
· 10-200 mu 1 likido mugitzeko puntuan laginaren puntu gehienetan erabil daiteke. Zulo oso txikientzat (10μ1 baino gutxiago), kola sekuentziatzeko erabiltzen den pipeta buru luzea erosoagoa da.
· Pipetatzea laginean murgilduta, poliki-poliki mugitzen diren fluidoak arnastea. Lagina glizerinarekin itsaskorra ager daiteke eta ponpaketa azkarrak aireko burbuilak pipeta buruan marraztu ditzake.
· Laginak pipeting burua arnastu ondoren, buru-fluidoa poliki-poliki mugituko da hodien ertzean edo papera xurgatzen duen buruko likidoa tantetatik kanpo. Kontuz lagina ez zuritzeko.
Lagina lagin zuloan jarri
· Presio pixka bat mantentzeko gailuak, laginak zertxobait mugitu gainezka dagoen burua.
· Bufferrean sartutako burua, lekua zuloak baino zertxobait altuagoak dira, presio positiboa mantentzen dute. Pipetaren punta zulo txiki batean txertatu daiteke.
· Laginak poliki eta etengabe ateratzen dira. Pipeta punta puntuko lagin zuloaren gainetik kokatzen da, eta lagina zuloan hondoratuko da. Utzi laginaren hondora lagin zuloa bete beharrean sartu beharrean.
· Laginaren azken tantak burua likidoa, likidoa bigarren itzulira joango da, poliki-poliki likidoa mugitu, bufferretik atera
Nola egin kola laginketa bertikala?
· Kola puntu bertikala bi beiraren artean eratutako zulo bertikalak. Kola oso meheetan, pipeta burua ezin da beirazko bi plateren artean txertatu. Ikusi glizerina! Jarri pipeta burua laginaren zuloaren gainean eta lagina zuloan hondoratuko da.
· Point lagina aurretik, ziurtatu polipropilenazko akiliko laginaren zuloaren puntu bertikala garbitzen dela. Garbitu gabeko akrilamida eta laginaren zuloaren behealdean ager daitekeen ura. Urak lagin zuloa nabarmen txikiagoa izan dezake. Erabili 25ml edo 50ml xiringa eta 18 zabalera orratza. Egin elektroforesiaren bufferrean eta arretaz lagin zuloa.
· Zaila izan daiteke laginaren zuloa ikustea, baina, berean, gainerakoa erraza da. Gehiegizko zuloak badaude, laginaren bufferra bromofenol urdinarekin probatu daiteke.
Posta: 2012-11-11