Poliakrilamida gel elektroforesirako neurriak

· poliakrilamidagel muztioa akrilamida monomeroa, polimerizazio hasierako materiala, katalizatzailea eta gatza eta buffer nahastearen eskubidea elkarrekin.

· akrilamidaeta BIS (N, N '- metileno akrilamida bikoitza) monomero formako gel-matrizea da.

· amonio persulfatoa abiarazte itsasgarriaren polimerizazio-prozesua. Kolaren formulazioak uretan prestatutako % 10eko amonio persulfato-soluzioa behar du. Informazio gehienek erabilera aktiboaren beharra adierazten zuten. Hala ere, % 10eko irtenbidea 4 ℃-tan jar daiteke hainbat astez jarduera galera nabarmenik gabe. Sortu 10 ml eta bota kola batu ez denean.

Aholkua: ehunekoaakrilamidasekuentziazioan kola eta proteina kola ez da berdina. Aurrez egindako akrilamida: BIS soluzioa erabiltzen baduzu, ziurtatu botila egokia duzula.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametil etilendiamina) katalizatzaile bat da, botila marroi batean, hozkailuan jarria. Gehitu kola bota aurretik.

· Elektroforesian erabiltzen den beira poliakrilamida elektroforesiaren aurretik eta ondoren garbitu behar da. Elektroforesiaren ondoren, garbitu eskuila leun batekin eta zapi ur beroan xaboiarekin, garbitu ur distilatuarekin eta lehortzen utzi.

· Hezetasunak eta hautsak sor ditzakete polimero hutsarekin. Elektroforesiaren aurretik, garbitu beirazko plaka beira garbigailuarekin eta garbitu eskuila leun batekin. Garbitu ur destilatuarekin eta lehortu ondo paperezko garbiketa batekin. Paperarekin garbitu aurretik %70eko etanolarekin garbitzeak garbitu eta lehortzen azkartzen laguntzen du. Gehitu akrilamidaren laginak segidan: BIS, ura, soluzio tampona, amonio persulfatoa, TEMED. Ondo astindu eta berehala bota.

Ez da beharrezkoa poliakrilamida desgasifikatzea polimerizatu aurretik. (Akrilamida hutsean jartzen zen burbuilak kentzeko, oxigenoak polimerizazioa galarazten duelako).

Kolatze-puntu horizontaleko lagin-puntak.

· Jarri paper beltz bat beheko koadroan, hondo beltza lagin-zulo bat egiteko argiago ikusteko.
· kola-tanga betetako buffer, koloidearen gainean.
· Ertzak argi bat badu, piztu argiak, utzi argiak koloide distira egiten. Marraztu lagina pipetara.
· Pipeteatzeko gailu automatikoa erabiliz.
· 10-200 mu-tan 1 puntu mugikor likido erabil daiteke laginaren puntu gehienetan. Lagin-zulo oso txikietarako (10μ1 baino gutxiago), kola sekuentziatzeko erabiltzen den pipeta-buru luzea erosoagoa da.

· Laginaren barruan murgilduta besterik ez da pipeteatzea, poliki-poliki mugitzen den fluidoa arnastuz. Lagina glizerinarekin itsaskorra ager daiteke, eta ponpaketa azkarrek aire-burbuilak pipeta-buruan sartu ditzake.

· Pipeta-burua inhalatu ondoren laginak, likido-burua astiro-astiro mugituko dute hodiaren ertzean edo garbiketa-paperak likido-burua zurrupatzen dute tantetatik kanpo. Kontuz ibili lagina ez zurrupatzeko.

Jarri lagina lagin-zuloan

· Pipeteatzeko gailua presio apur bat mantentzeko, laginak apur bat mugiarazi gainezka-likidoaren burua.
· Bufferean sartutako pipeta-buruak, puntu-zuloak baino apur bat gorago, presio positiboa mantentzen du. Pipetaren punta zulo txiki batean sar daiteke.
· Poliki-poliki eta etengabe laginak atera. Pipeta punta puntuko lagin-zuloaren gainean jartzen da, eta lagina zuloan hondoratuko da. Utzi lagina hondoratzen lagin-zuloa betetzeko sartu beharrean.
· Buru likidoa duen laginaren azken tanta behin, likidoa bigarren hankara mugituko da, poliki-poliki igoko da likidoaren mugimendua, atera bufferetik

Nola egin kola bertikala laginketa?

· Bi beira zatien artean egindako kola-puntu bertikalak lagin-zuloak. Oso kola mehean, pipeta-burua ezin da beirazko bi plaken artean ere sartu. Ikusi glizerina! Jarri pipeta burua lagin-zuloaren gainean eta lagina zuloan hondoratuko da.
· puntu lagina aurretik, ziurtatu polipropileno acil gelaren lagin zuloaren puntu bertikala garbitu egiten dela. Garbitu polimerizatu gabeko akrilamida eta lagin-zuloaren behealdean ager daitekeen ura. Urak lagin-zuloa nabarmen txikiagoa izan dezake. Erabili 25 ml edo 50 ml-ko xiringa eta 18 galgako orratza. Bota elektroforesi bufferra eta garbitu arretaz lagin-zuloa.
· Zaila izan daiteke laginaren zuloa ikustea, baina, aldi berean, gainerakoa erraza da. Gehiegizko zuloak badaude, laginaren buffera bromofenol urdinarekin probatu daiteke.