Poliakrilamida gel elektroforesirako neurriak

· poliakrilamidagel muztioa akrilamida monomeroa, polimerizazio hasierako materiala, katalizatzailea eta gatza eta buffer nahastearen eskubidea elkarrekin.

· akrilamidaeta BIS (N, N '- metileno akrilamida bikoitza) monomero formako gel-matrizea da.

· amonio persulfatoa abiarazte itsasgarriaren polimerizazio-prozesua.Kolaren formulazioak uretan prestatutako % 10eko amonio persulfato-soluzioa behar du.Informazio gehienek erabilera aktiboaren beharra adierazten zuten.Hala ere, % 10eko irtenbidea 4 ℃-tan jar daiteke hainbat astez jarduera galera nabarmenik gabe.Sortu 10 ml eta bota kola batu ez denean.

Aholkua: ehunekoaakrilamidasekuentziazioan kola eta proteina kola ez da berdina.Aurrez egindako akrilamida: BIS soluzioa erabiltzen baduzu, ziurtatu botila egokia duzula.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametil etilendiamina) katalizatzaile bat da, botila marroi batean, hozkailuan jarria.Gehitu kola bota aurretik.

· Elektroforesian erabiltzen den beira poliakrilamida elektroforesiaren aurretik eta ondoren garbitu behar da.Elektroforesiaren ondoren, garbitu eskuila leun batekin eta zapi ur beroan xaboiarekin, garbitu ur distilatuarekin eta lehortzen utzi.

· Hezetasunak eta hautsak sor ditzakete polimero hutsarekin.Elektroforesiaren aurretik, garbitu beirazko plaka beira garbigailuarekin eta garbitu eskuila leun batekin.Garbitu ur destilatuarekin eta lehortu ondo paperezko garbiketa batekin.Paperarekin garbitu aurretik %70eko etanolarekin garbitzeak garbitu eta lehortzen azkartzen laguntzen du.Gehitu akrilamidaren laginak segidan: BIS, ura, soluzio tampona, amonio persulfatoa, TEMED.Ondo astindu eta berehala bota.

Ez da beharrezkoa poliakrilamida desgasifikatzea polimerizatu aurretik.(Akrilamida hutsean jartzen zen burbuilak kentzeko, oxigenoak polimerizazioa galarazten duelako).

Kolatze-puntu horizontaleko lagin-puntak.

· Jarri paper beltz bat beheko koadroan, hondo beltza lagin-zulo bat egiteko argiago ikusteko.
· kola-tanga betetako buffer, koloidearen gainean.
· Ertzak argi bat badu, piztu argiak, utzi argiak koloide distira egiten.Marraztu lagina pipetara.
· Pipeteatzeko gailu automatikoa erabiliz.
· 10-200 mu-tan 1 puntu mugikor likido erabil daiteke laginaren puntu gehienetan.Lagin-zulo oso txikietarako (10μ1 baino gutxiago), kola sekuentziatzeko erabiltzen den pipeta-buru luzea erosoagoa da.

· Laginaren barruan murgilduta besterik ez da pipeteatzea, poliki-poliki mugitzen den fluidoa arnastuz.Lagina glizerinarekin itsaskorra ager daiteke, eta ponpaketa azkarrek aire-burbuilak pipeta-buruan sartu ditzake.

· Pipeta-burua inhalatu ondoren laginak, likido-burua astiro-astiro mugituko dute hodiaren ertzean edo garbiketa-paperak likido-burua zurrupatzen dute tantetatik kanpo.Kontuz ibili lagina ez zurrupatzeko.

Jarri lagina lagin-zuloan

· Pipeteatzeko gailua presio apur bat mantentzeko, laginak apur bat mugiarazi gainezka-likidoaren burua.
· Bufferean sartutako pipeta-buruak, puntu-zuloak baino apur bat gorago, presio positiboa mantentzen du.Pipetaren punta zulo txiki batean sar daiteke.
· Poliki-poliki eta etengabe laginak atera.Pipeta punta puntuko lagin-zuloaren gainean jartzen da, eta lagina zuloan hondoratuko da.Utzi lagina hondoratzen lagin-zuloa betetzeko sartu beharrean.
· Buru likidoa duen laginaren azken tanta behin, likidoa bigarren hankara mugituko da, poliki-poliki igoko da likidoaren mugimendua, atera bufferetik

Nola egin kola bertikala laginketa?

· Bi beira zatien artean egindako kola-puntu bertikalak lagin-zuloak.Oso kola mehean, pipeta-burua ezin da beirazko bi plaken artean ere sartu.Ikusi glizerina!Jarri pipeta burua lagin-zuloaren gainean eta lagina zuloan hondoratuko da.
· puntu lagina aurretik, ziurtatu polipropileno acil gelaren lagin zuloaren puntu bertikala garbitu egiten dela.Garbitu polimerizatu gabeko akrilamida eta lagin-zuloaren behealdean ager daitekeen ura.Urak lagin-zuloa nabarmen txikiagoa izan dezake.Erabili 25 ml edo 50 ml-ko xiringa eta 18 galgako orratza.Bota elektroforesi bufferra eta garbitu arretaz lagin-zuloa.
· Zaila izan daiteke lagin-zuloa ikustea, baina, aldi berean, gainerakoa erraza da.Gehiegizko zuloak badaude, laginaren buffera bromofenol urdinarekin probatu daiteke.